Лабораторное отделение

Общие требования преаналитики ПЦР- диагностики.

 

1. ПРАВИЛА ПОЛУЧЕНИЯ И ПОДГОТОВКИ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ

1. Осуществлять взятие клинического материала, строго следуя инструкции, только стерильными одноразовыми инструментами в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры. Работать в одноразовых перчатках.

2. Взятие клинического материала должно производиться в пробирки с транспортной средой,  (в случаях, где использование транспортной среды является необходимым).

3. Сразу после взятия плотно закрывать пробирки, флаконы с клиническим материалом, не касаясь их внутренней поверхности и внутренней поверхности крышек.

6. Строго соблюдать правила хранения и транспортирования клинических проб. Охлаждающие элементы перед  транспортированием клинического материала замораживать заранее.

 

2. ИНСТРУКЦИЯ-ТРЕБОВАНИЕ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К КАЧЕСТВУ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР.

1. К каждой направляемой пробе обязательно наличие заполненного бланка – направления на необходимые исследования.

2. Бланк – направления  заполняется четкими буквами, с обязательным указанием всех данных о пациенте: ФИО, дата рождения,диагноз, ФИО лечащего врача, дата и время взятия образца, , перечень необходимых исследований.

3. Необходимо наличие маркировки (№) на емкости с биоматериалом, совпадающей с информацией на бланке-заявке.

4. Взятый материал должен находиться в соответствующей емкости – пробирка с нужным коагулянтом, консервантом и т.д.

5.В пробирках для иммунологических исследований должно соблюдаться правильное соотношение между кровью и антикоагулянтом (до метки).

6.В пробах крови необходимо отсутствие гемолиза, а также сгустков крови с антикоагулянтом.

7. Материал для ПЦР должен содержать эпителий без крови, гноя, слизи, но в некоторых случаях  допускается умеренное присутствие примесей в виде слизи и крови.

8. Хранение и транспортировка биоматериала должно выполняться с соблюдением  «ХОЛОДОВОЙ цепи»

При нарушении указанных выше требований биоматериал на исследование не принимается.

 

ПРАВИЛА ПОДГОТОВКИ ПАЦИЕНТОВ ДЛЯ ОБСЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР

 

Материал-КРОВЬ

При плановом обследовании рекомендуется производить взятие крови:

  • утром натощак (кровь)

  • до осуществления диагностических или терапевтических процедур,

  • за 24 ч до исследования исключить прием алкоголя.

Следует помнить, что:

  • утренний прием лекарств должен проводиться только после взятия крови,

  • физическая и мышечная нагрузка, тренировки, упражнения должны быть исключены как минимум за 3 дня до взятия крови,

Строго соблюдайте правила хранения и транспортировки клинических проб!

Не встряхивайте пробирки: резкое смешивание может вызвать пенообразование и гемолиз!

Хранение: 30 мин. при комнатной температуре, затем поместить в холодильник при tº +4 +8 ºС.

Транспортировка: в вертикальном положении в термоконтейнерах при tº +4 +8 ºС.

 

Цветовой код Число перемешиваний Тип анализа Область применения Химические наполнители
красный - Биохимические, гормональные, серологические исследования. Онкомаркеры. Аутоантитела. Исследования сыворотки в клинической химии, серологии, иммунологии Активатор образования сгустка
голубой 3-4 раза Гемостаз, Д-димер Исследования Коагуляции, ВА, Д-димер Цитрат натрия
фиолетовый или сиреневый 8-10 раз Гематология. Гликозилированный гемоглобин. АКТГ. ПЦР, иммунный статус, ретикулоциты, СОЭ, лекарственная непереносимость Исследования цельной крови ЭДТА

 

ВНИМАНИЕ!

Все пробирки с фиолетовой, голубой, желтой крышками  с момента взятия до момента транспортировки хранятся при комнатной температуре. При хранении избегать воздействия солнечного света, источников тепла и холода.
Все пробирки с красной (желтой) крышкой, а также пробирки для мазков ПЦР с момента взятия до момента транспортировки хранятся при температуре 4–6 градусов (на дверце холодильника).
Транспортировка всех пробирок осуществляется в термоконтейнерах. В зимнее время года без хладагентов, летом в термоконтейнерах с   хладоагентом.

 

ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.

 

Материал-соскобы.

Для проведения анализа, как правило, используются следующие виды клинического материала:

  • У женщин: соскобное отделяемое слизистых оболочек цервикального канала, влагалища, уретры; моча.

  • У мужчин: соскобное отделяемое слизистой оболочки уретры, моча, секрет предстательной железы.

  • У детей: моча, отделяемое конъюнктивы глаз.

Взятие клинического материала должно производиться в пробирки с транспортной средой.

 

Полученные образцы (кроме образцов мочи) можно хранить:

  • при комнатной температуре – в течение 24-48 часов;

 

Полученные образцы мочи можно  хранить:

  • при комнатной температуре – в течение 6 часов;

  • при температуре от 2 до 8 °С – в течение суток;

Доставка клинических образцов осуществляется в специальном контейнере с охлаждающими элементами.

 

Для проведения исследования на наличие ДНК/РНК определенного микроорганизма анализируются следующие виды клинического материала:

для выявления ДНК Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma spp.,U.parvum / U.urealyticum, Mycoplasma hominis соскобное отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, образцы мочи, секрет предстательной железы
выявления ДНК Chlamydia trachomatisи Neisseria gonorrhoeae возможно также исследовать отделяемое конъюнктивы глаз, мазки из  ротоглотки. 
для выявления ДНК HSVI и II типов, Treponema pallidum соскобное отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта,  ротовой полости, отделяемое везикул (пузырьковых высыпаний) и эрозивно-язвенных поражений кожи и слизистых оболочек. 
для выявления ДНК HSVI и II типов можно также исследовать плазму крови и ликвор, отделяемое конъюнктивы глаз
для выявления ДНК CMV  соскобное отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, моча, слюна и плазму крови
для выявления ДНКCandida albicans соскобное отделяемое слизистых оболочек урогенитального тракта, ротовой полости; моча
для выявления ДНКGardnerella vaginalis соскобное отделяемое слизистой влагалища

 

Для диагностики инфекций мочеполовой системы используют различный клинический материал – соскобное отделяемое или мазок со слизистых оболочек, мочу, секрет предстательной железы, отделяемое конъюнктивы глаз, слюну, плазму крови, ликвор, отделяемое везикул (пузырьковых высыпаний) и эрозивно-язвенных поражений, мазки из  ротоглотки.

Выбор клинического материала зависит от диагностической задачи и пола.

Для взятия материала используются специальные одноразовые зонды, зонды-­тампоны, щеточки.

 

КЛИНИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ ИЗ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН

Взятие материала. Соскобы производят из трех точек тремя разными зондами: цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра — в одну пробирку, поочередно ополаскивая каждый зонд. При необходимости берут материал из эрозивно-язвенных поражений. Отделяемое забирают в небольшом количестве. Присутствие примесей (слизь, кровь, гной) недопустимо, т. к. приводит к деградации исследуемых микроорганизмов.

ВНИМАНИЕ!

Никогда не смачивайте в пробирках  зонды перед забором отделяемого, т. к. они заполнены или содержат транспортную среду (может вызвать зуд, раздражение, ожог)!

Для диагностики воспалительных заболеваний (цервицит, вагинит, уретрит), ВПЧ-тестирования, диагностики бактериального вагиноза  материал с каждой локализации забирается в отдельную пробирку и отдельными стерильными щеточками или зондами. При других диагнозах допускается  забор  в одну пробирку. 

 

СОСКОБ ЭПИТЕЛИЯ  ИЗ ЦЕРВИКАЛЬНОГО КАНАЛА ЖЕНЩИН

Доступ к цервикальному каналу обеспечивают с помощью  стерильного гинекологического зеркала. Взятие материала производят с помощью цервикальной цитощетки в пробирку на 2-5 мл со специальной транспортной средой  розового цвета. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. Удаляют слизь и отделяемое  влагалища с поверхности шейки матки стерильным   тампоном, вводят рабочую часть щеточки в цервикальный канал и делают два­-три полных оборота по часовой и против часовой стрелки. Извлекают  щеточку, избегая касания стенок влагалища и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть щеточки обламывают в области насечки  и оставляют в пробирке с транспортной средой.   При  невозможности обломить рабочую часть щеточки  , следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5–10 раз по часовой и против часовой стрелки , избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки. Отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.                                                                             

Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части щеточки или универсального зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно­положительных результатов.

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, допускается хранение при комнатной температуре в течение 24-48 часов

 

СОСКОБ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ИЗ УРЕТРЫ ЖЕНЩИНЫ

Получение  материала из уретры  производят с помощью универсального зонда  в пробирку на 2-5 мл со специальной транспортной средой  розового цвета. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. Перед  взятием соскоба из уретры необходимо обработать наружное отверстие уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить отделяемое из влагалища. Необходимо произвести массаж уретры пальцем со стороны влагалища , прижимая ее к лобковой кости. Ввести рабочую часть зонда в уретру на глубину 1-1,5 см и аккуратно, не поранив слизистую,   несколькими вращательными движениями собрать отделяемое уретры (соскоб эпителиальных клеток) и перенести зонд в пробирку с транспортной средой.   Рабочую часть зонда, с исследуемым материалом, обломить в области насечки, плотно закрыть крышку и промаркировать.

Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно­положительных результатов.   При  невозможности обломить рабочую часть зонда, его вращают в течении 10-15 сек, избегая при этом   разбрызгивания раствора. Далее, вынимая зонд из пробирки, прижимают  его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют  из пробирки.

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, допускается хранение при комнатной температуре- не более 6 час, при температуре бытового холодильника  в течение 24-48 часов.

В процедурном кабинете должен быть запас стерильных зондов (либо тампонов) для удаления слизи.                                                       

Транспортировка: в термоконтейнерах с охлаждающими элементами

                                   

СОСКОБ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК  ИЛИ МАЗОК ИЗ ВЛАГАЛИЩА

Использование гинекологического зеркала может ограничивать доступ к поверхности боковых стенок влагалища, откуда следует брать отделяемое. Взятие материала производят с помощью зонда-­тампона или универсального зонда в пробирку с транспортной средой. Отделяемое  из влагалища берут в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи и крови. При избытке слизи и обильных выделениях, их удаляют стерильным ватным тампоном. Затем рабочей частью зонда-­тампона вращательным движением проводят по поверхности боковых стенок влагалища и (или) слизистой в области заднего свода влагалища и экзоцервикса , максимально полно собирая отделяемое.   Переносят  зонд-­тампон в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть зонда-­тампона, содержащую исследуемый материал, обламывают в области насечки  и оставляют в пробирке с транспортной средой.

Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части зонда-­тампона! При правильном заборе материала, когда объем забранного отделяемого достаточный, транспортная среда должна помутнеть, а ее цвет должен измениться с розового на лимонно-желтый за счет изменения pH (при кислом рН отделяемого влагалища ). Пробирку плотно закрывают крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки и маркируют .

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, допускается хранение при комнатной температуре в течение 6 часов, в бытовом холодильнике 24-48 часов.

Транспортирование клинического материала  осуществляют в специальном  термоконтейнере  с охлаждающими  элементами или в термосе со льдом.

 

МОЧА

Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 20–30 мл в специальный сухой стерильный флакон или контейнер на 50-­60 мл. Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Женщинам желательно закладывать тампон во влагалище перед сбором материала для предупреждения контаминации мочи отделяемым из влагалища. Также не следует производить сбор мочи во время менструации.

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, допускается хранение в бытовом холодильнике в течение 24 часов.

Транспортирование клинического материала осуществляют в специальном  термоконтейнере  с охлаждающими  элементами или в термосе со льдом.

 

КЛИНИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ ИЗ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА МУЖЧИН

(Тип клинического материала определяется диагностической задачей)

 СОСКОБ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ИЗ   УРЕТРЫ МУЖЧИН.

Взятие материала производят с помощью зонда  в пробирку на 2-5 мл со специальной транспортной средой : с муколитиком (розового цвета):  среда для мазков, транспортная среда ­ЭДЭМ. Перед взятием соскоба из уретры обрабатывают головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором. Производят массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном. Вводят зонд в уретру на глубину 1–2 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют. В случае отсутствия насечки погружают рабочую часть зонда в среду и, прижав ее к внутренней стенке пробирки, вращают зонд 5– 10 секунд, после чего зонд удаляют, а пробирку плотно закрывают.

Недопустимо использование ножниц для обрезания рабочей части зонда! Пробирку плотно закрывают крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и маркируют. Отделяемое забирают в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя.

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора.При отсутствии такой возможности, допускается хранение в бытовом холодильнике в течение 24 часов.

Транспортирование клинического материала осуществляют в специальном  термоконтейнере  с охлаждающими  элементами или в термосе со льдом.

 

СЕКРЕТ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Перед получением секрета простаты головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном. Секрет простаты забирают после предварительного массажа простаты через прямую кишку. Врач проводит массаж с надавливанием несколькими энергичными движениями от основания к верхушке. После окончания массажа предстательной железы ее секрет в количестве 0,5–1 мл собирают в одноразовую стерильную сухую пластиковую пробирку объемом 2-5 мл или стерильный сухой контейнер объемом 50–60 мл. Пробирку плотно закрывают крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки, и маркируют.

При невозможности получить секрет сразу после массажа простаты - собирают первую порцию мочи (в которой содержится секрет предстательной железы) в количестве 15–25 мл (см. правила забора мочи).

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, ­ при комнатной температуре — в течение 6 часов  в бытовом холодильнике в течение 24 часов.

Транспортирование клинического  материала осуществляют в специальном  термоконтейнере   с охлаждающими  элементами или в термосе со льдом.

 

СПЕРМА

Взятие материала. Взятие спермы осуществляют в стерильный одноразовый флакон.

Хранение: при комнатной температуре — не более 6 часов, при tº +2 +8 ºС — не более суток

Транспортировка: в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

 

СЛЕЗНАЯ ЖИДКОСТЬ

Слезную жидкость в количестве не менее 0,5 мл собирают, используя одноразовые пластиковые пипетки, в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Для усиления слезоотделения проводят провокацию слезоточивым веществом (обычно используют нашатырный спирт).

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, ­ при комнатной температуре — в течение 6 часов  в бытовом холодильнике в течение 24 часов.                                                                                                                                                                 

 

ОТДЕЛЯЕМОЕ КОНЪЮНКТИВЫ

Материал забирают сухим стерильным ватным тампоном на пластиковой основе под местной анестезией (2 капли раствора декаина). Оттянув нижнее веко, вращающими движениями проводят зонд 4­-5 раз по конъюнктиве, захватывая внешний и внутренний углы глаза. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в одноразовую стерильную пробирку объемом 2 мл, содержащую  соответствующую транспортную среду. Погрузив рабочую часть зонда в транспортную среду, аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части и оставляют рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой и маркируют.

Материал  для исследования доставляется в КДЛ в день забора. При отсутствии такой возможности, допускается хранение при комнатной температуре — в течение 6 часов; ­ при температуре 2–8 °С — в течение 3 суток.


« Вернуться